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Precellys:研磨蜱虫提取可培养的活体细菌

发布时间:2021-03-04浏览:315次

疾病从老鼠传播到人体通常通过与老鼠排泄物直接接触、在受污染的环境或者通过体外寄生虫例如蜱虫(硬蜱属Ixodes sp)等方式。尤其在野生老鼠中会通常遇到三宿主蜱虫,它们已经被证明了携带红孢子虫属Anaplasma sp和巴贝西虫属Babesia sp两种病原体。这些病原体通常在环境中可以找到,例如芽孢杆菌和类芽孢杆菌都是普遍存在的,近一些稀有的病原体在临床实验中也被发现,它们会引起一些人类传染病。

 

人类居住地通过人类活动产生的废弃物通常会吸引野生啮齿动物,这有助于蜱虫病原体的传播。

正因为如此,一些研究机构开始从野生啮齿动物收集蜱虫,研究蜱虫体外可培养的活体细菌。

 

实验材料与实验方案

捕获啮齿动物(马来西亚雪兰莪州森林),并鉴定种类如表1所示。

收集捕获啮齿动物体外的蜱虫。从形态学上鉴定老鼠体外收集的饱满的成年蜱虫。

 

研磨之前使用70%的乙醇以及去核酸酶的水对收集的蜱虫单独进行清洗消毒,确保清除环境中的污染物。

 

清洗过的蜱虫放在Precellys24中研磨,研磨管选择Precellys® Lysing kit CK28, ref. P000911-LYSK0-A.0(2.8mm陶瓷珠),研磨管中加500ulPBS,研磨程序为转速5500rpm,研磨时间40s。

 

研磨之后的蜱虫接种到含有5%绵羊血的哥伦比亚琼脂培养基上,在37℃有氧的条件下培养48小时。

 

细菌培养纯化获得单个的克隆,通过16S rDNA测序来鉴定。

 

实验结果

通过16S rDNA,ctpA测序和生物化学检测,在老鼠(Sundamys muelleri大巽他鼠属)如图1中A所示中收集饱满的成年雌性蜱虫如图1B和C所示鉴别出一种独一/无二的细菌分离物Paenibacillus lautus,属于类芽孢杆菌的一种。

 

P. lautus分离物对阿米卡星,环丙沙星,亚胺培南和美罗培南十分敏感,同时对氨苄青霉素、青霉素、克林霉素、氯霉素、利福平、*氧苄磺胺甲恶唑以及红霉素和庆大霉素有一定抗性。

 

实验结论

Precellys 24结合正确的研磨管和研磨条件可以从蜱虫或感染的组织样品中提取可培养的细菌,确保在研磨之后可继续培养。

 

人体被蜱虫咬过之后,蜱虫体外携带的P. lautus细菌可能会引起疾病。为了减少野生啮齿动物对人类居住地的影响,在公共娱乐场所应有组织监督废物的处理。

 

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