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Precellys:助力脾脏与肉芽瘤中两种朊病毒株的检测

发布时间:2020-11-13浏览:51次

朊病毒是可以引起多种严重的神经性退行性疾病的蛋白质,包括牛海绵状脑病,也是我们常说的疯牛病。

 

据报道,从目前一些感染的动物看,一些朊病毒株在神经系统聚集之前,会首先在淋巴组织进行复制和聚集。这个现象成为嗜淋巴细胞现象,在朊病毒入侵神经系统时起到重要作用。相反其他的朊病毒株在淋巴组织中没有发现这个现象。

 

大量文献表明淋巴组织中朊病毒的复制是需要树突状细胞(FDCS)。令人惊讶的是,朊病毒可以在肉芽瘤中被发现,然而肉芽瘤是一种可能因为缺乏树突状细胞而引起的炎症症状,这对于朊病毒如何入侵淋巴组织和炎症组织就有了新的问题。

 

本研究中检测了两种结构特征相似,不同嗜淋巴细胞现象的朊病毒株,C-BSE和L-BSE。结果也表明朊病毒在脾脏和肉芽瘤中有聚集的能力。

 

实验材料与程序

1.实验建立

在接种朊病毒之前的21天和42天,对绵羊PrP转基因(tg338)老鼠皮下注射PBS/CFA来诱导肉芽瘤的产生。在第0天对这些老鼠接种感染了C-BSE和L-BSE的老鼠脑浆(脑内接种)。在接种后的不同时间收集大脑、脾脏、肉芽瘤样品,并对这些样品分别进行免疫荧光或Western Blot检测(图1)。

2.免疫印迹

收集的组织样本使用法国Bertin公司的Precellys生物样品研磨器进行研磨,2ml的研磨管,缓冲液含5%葡萄糖,搭配1.2mm的陶瓷研磨珠(也可以使用CK14研磨试剂盒),研磨程序如下:

脾脏:研磨转速6500rpm,研磨时间45s,2个循环(Precellys Evolution可以使用8800rpm)

肉芽瘤:研磨转速6500rpm,研磨时间45s,2个循环(Precellys Evolution可以使用8800rpm)

脑组织:研磨转速6500rpm,研磨时间45s,1个循环(Precellys Evolution可以使用8800rpm)

 

组织匀浆里可以针对脾脏组织或肉芽瘤比较小的组织将葡萄糖含量从5%调整到10%或20%。样本放在Criterion XT(Bio-rad,美国)凝胶上跑样,电子信号传递到纤维膜(Bio-rad),使用生物素化的Sha31 anti-PrP单克隆抗体进行标记检测。

 

实验结果

 

如图2所示,在受C-BSE和L-BSE感染的老鼠脑组织、脾脏、肉芽瘤中不同天数显示的PrP朊病毒检测结果。L-BSE是有嗜淋巴细胞现象的朊病毒株,C-BSE是没有嗜淋巴细胞现象的朊病毒株。其中在第43天时,在受L-BSE感染的脾脏和肉芽瘤中均检测到了朊病毒,但在脑组织中没有检测到;在第85天时受C-BSE感染脑组织中检测到了朊病毒;在第132天时,受感染脑组织中检测到了大量的朊病毒聚集;结果表明受L-BSE这种有嗜淋巴细胞现象的朊病毒株感染的脾脏和肉芽瘤,也是会先在脾脏和肉芽瘤组织中产生朊病毒的复制,之后影响脑组织。

结论

 

L-BSE和C-BSE两种朊病毒株虽然有相似的生物特性,但有不同的嗜淋巴细胞现象。我们从本研究中看出收到L-BSE感染的老鼠,在脾脏和肉芽瘤中都有朊病毒的聚集。另一方面在肉芽瘤中并没有检测到C-BSE朊病毒。这些结果表明对淋巴组织有依赖性的朊病毒株同时也对肉芽瘤有影响。使用法国Bertin公司的Precellys生物样品研磨器可以高效研磨例如脾脏、脑组织、肉芽瘤等样本,之后通过Western Blot完成检测。此外,与Precellys搭配的Cryolys制冷系统可以快速降温,保证在研磨的同时准确控制研磨腔室温度稳定在0-10℃,为RNA和蛋白质的提取保驾护航。

 

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