实验材料
GenoSPYD过滤试剂盒(Blue DNA Compaion公司,法国);
Precellys Evolution组织研磨器(Bertin公司,法国);
MagSPYD自动化核酸提取平台(Blue DNA Compaion公司,法国);
MIC PCR仪;
GenoSPYD针对Enterococcus spp与E.coli的q-PCR定量试剂盒。
实验程序
1.微生物样品收集:每个样品被0.45μm的滤膜过滤。之后将滤膜装到GenoSPYD裂解管中,并加入1.5mlGenoSPYD细菌裂解缓冲液;
2.将裂解管放入到Precellys Evolution组织研磨器中,研磨程序为转速6500rpm、3个循环、每个循环研磨45s、循环间歇30s;
3.RNA提取:包含RNA的溶菌产物使用GenoSPYD RNA提取试剂盒进行纯化,可在MagSPYD自动化核酸提取平台进行;
4.在MIC PCR仪上进行qRT-PCR的检测。
实验结果
图1为对Enterococcus spp检测的qRT-PCR放大曲线结果, 表1为水中肠球菌Enterococcus spp与大肠杆菌E.coli的LOQ(定量检测限)和LOD(检测下限)的结果。
结论
GenoSPYD自动化产品解决方法配合Precellys组织研磨器可以在3小时内快速检测和定量活微生物样本中一些特定如大肠杆菌、肠球菌、葡萄球菌、假单胞菌的RNA含量等。此方法的水质检测指标可以达到100CFU,同时也被世界著名水务公司Suez Environment苏伊士环境集团认证。
细菌样本裂解程度直接决定了之后提取RNA的效率,Precellys Evolution研磨仪具备高性能、高效率、安全等特点,同时有冷却装置Cryolys Evolution,可使整个研磨过程的温度准确维持在0-10℃,加配无RNA酶的研磨kit,轻松实现稳态RNA的提取,助力水源中细菌污染物的快速定量检测,值得信赖!
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