使用Coriolis MICRO空气采样器结合基于基因芯片技术的多重PCR检测 ——推动检测多种气传真菌种类的超快速检测系统的发展
气传真菌能够引起一些生物腐蚀和健康问题。为了避免这些损害,在一些室内环境例如工厂、博物馆和其他一些公共场所检测真菌菌落就显得额外重要。然而目前常规的一些检测真菌的方法需要一个培养的过程。
有研究报道Coriolis® µ有足够收集能力,通过PCR扩增后,可以有效检测单一真菌物种,而且不需要培养的过程。
本次应用中,我们评估了一个超快速检测系统,由基于基因芯片技术的多重PCR检测系统GENOGATE和Coriolis® µ空气采样器组成,用来检测气传真菌。
本次应用的实验材料包括:Coriolis® µ空气采样器,无菌锥形管,15ml收集液体(Bertin公司);基于基因芯片技术的多重PCR检测系统GENOGATE(Toyo Seikan公司)。
本次应用的实验过程如下图所示: 1.使用Coriolis® µ空气采样器收集包括真菌孢子的微粒; 2.筛选真菌孢子并提取DNA; 3.荧光标记; 4.使用通用引物进行多重PCR扩增; 5.使用相同的引物对首轮PCR处理的样品再一次进行多重PCR扩增; 6.荧光检测分析目的基因。
通过与ITS序列分析获得已知的结果对比,来验证本次应用中这个超快速检测系统的性能,实验结果如下:表1为分析基因芯片技术的检测下限,两轮PCR都检测到了不同种类的真菌;表2对比分析了两种方法,一种为用Coriolis® µ空气采样器,用多重PCR分析;第二种为使用air IDEAL采集器收集培养的真菌菌落,然后用ITS序列分析结果。结果显示两种方法都检测到了不同种类的真菌,而使用Coriolis® µ和基因芯片分析的方法检测到的菌落形成单位都要远高于第二种方法,分别为750cfu/62cfu和469cfu/79cfu;使用Coriolis® µ的空气流速的可达300L/min,air IDEAL仅100L/min。使用Coriolis® µ空气采样器和基因芯片技术的超快速检测系统,不需要培养过程,成功检测到不同种类的气传真菌。
即使在严重污染的环境下,结合Coriolis® µ空气采样器和GENOGATE(多重PCR平台)可以有效地分析不同种类的气传真菌。这个系统在评估环境污染、特殊有害真菌检测、早期发现室内环境变化方面是一个有效的工具,当然这个系统也同样应用于化妆品、食品、饮品行业以及学术研究领域。
Coriolis µ空气微生物采样器 >>在液体样品中采集空气中的颗粒 >>适用于病毒、细菌、霉菌、花粉、孢子 >>适合后续培养和分子生物学标准检测方法
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